從一個生物學樣品中同時提取DNA，RNA和蛋白質一直是實驗人員理想的情景。這樣做不僅可以節省寶貴的樣本，更重要的是可以直接比較基因組，轉錄組和蛋白質組學信息，最大程度減少樣本差異，獲得更準確的實驗結果。

然而，能夠實現此功能的試劑盒不僅價格昂貴，而且普遍存在核酸提取完后，蛋白得率低的問題。使用TRIzol提取RNA，自1987年建立以來一直是經典的 RNA提取方法，根據三種生物大分子的溶解度不同，樣品中加入TRIzol并離心后，能夠有效的將RNA保留在最上層水相，將DNA保留在中間層，最底層有機相中則存儲著蛋白質。今天，小編為大家介紹一種優化的、從已經提取完核酸的TRIzol有機相中高效提取蛋白質的方法。話不多說，直接上方案：

?從一個生物學樣本中同時提取DNA，RNA和蛋白質

與傳統方法相比，該方法做了如下優化：

1. 組織勻漿步驟采用Bullet Blender Tissue Homogenizer (Next Advance, United States)替代手工液氮研磨。NAI Bullet Blender 組織勻漿儀采用專利的擊打技術，樣品勻漿更徹底，得率高，且獨立封閉操作無樣品交叉污染。采用空氣制冷，能夠保證生物大分子完整性。

2. 相分離步驟采用1-溴-3-氯丙烷替代氯仿。相比后者，1-溴-3-氯丙烷毒性更低，而且更有助于形成致密的中間層。

3. 蛋白沉淀步驟采用乙醇和水替代異丙醇，以獲得更高的蛋白得率。

4. 蛋白溶解步驟采用含有尿素的SDS buffer。無需加熱或超聲等額外操作便能夠有效溶解高分子蛋白，從而提高得率。

驗證實驗結果表明，對比直接用RIPA裂解液對組織進行蛋白抽提，使用優化的TRIzol方法從已經提取完DNA，RNA而剩余的有機相中提取肌肉蛋白，具有更高的蛋白得率（Figure 1. A）。尤其對于高分子量大蛋白的提取效率更高，這可能得益于更有效的溶解（Figure 1. B）。

同時，使用該方法提取蛋白可直接用于下游Western blot實驗。能夠準確辨別出 MyHC在增殖的C2C12細胞中不表達，但是在分化的細胞中表達（Figure 2. A）。而對于磷酸化Western blot，也鑒定出超負荷所造成的肌肉肥大組中Akt和RPS6的磷酸化水平上升Figure 2. B,C）

總結一下，小編今天為大家介紹了一款便宜、簡單、快速的從TRIzol有機相中高得率提取蛋白的方法，幫助大家實現從一個生物樣本中同時獲得DNA、RNA和蛋白質，并且與下游的Western blot實驗直接兼容。特別要提醒的是，美國Next Advance 公司研發的Bullet Blender是一款新穎、快速、高通量、高穩定性的組織細胞勻漿儀，具有樣品勻漿更徹底、得率高、通量高、無交叉污染、生物大分子完整性好等特點，滿足您多方面的樣品勻漿需求。

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參考文獻：

Wen Y, Vechetti IJ Jr, Valentino TR, McCarthy JJ. High-yield skeletal muscle protein recovery from TRIzol after RNA and DNA extraction. Biotechniques. 2020 Oct;69(4):264-269. doi: 10.2144/btn-2020-0083. Epub 2020 Aug 11. PMID: 32777951; PMCID: PMC7566772.