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      一種同時獲得DNA、RNA以及高得率蛋白質的提取方法

      版權所有,轉載請聯系基因市場部
      2020-12-17

      樣品制備專題



      從一個生物學樣品中同時提取DNA,RNA和蛋白質一直是實驗人員理想的情景。這樣做不僅可以節省寶貴的樣本,更重要的是可以直接比較基因組,轉錄組和蛋白質組學信息,最大程度減少樣本差異,獲得更準確的實驗結果。


      然而,能夠實現此功能的試劑盒不僅價格昂貴,而且普遍存在核酸提取完后,蛋白得率低的問題。使用TRIzol提取RNA,自1987年建立以來一直是經典的 RNA提取方法,根據三種生物大分子的溶解度不同,樣品中加入TRIzol并離心后,能夠有效的將RNA保留在最上層水相,將DNA保留在中間層,最底層有機相中則存儲著蛋白質。今天,小編為大家介紹一種優化的、從已經提取完核酸的TRIzol有機相中高效提取蛋白質的方法。話不多說,直接上方案:

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      ?從一個生物學樣本中同時提取DNA,RNA和蛋白質


      與傳統方法相比,該方法做了如下優化:

      1. 組織勻漿步驟采用Bullet Blender Tissue Homogenizer (Next Advance, United States)替代手工液氮研磨。NAI Bullet Blender 組織勻漿儀采用專利的擊打技術,樣品勻漿更徹底,得率高,且獨立封閉操作無樣品交叉污染。采用空氣制冷,能夠保證生物大分子完整性。

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      2. 相分離步驟采用1-溴-3-氯丙烷替代氯仿。相比后者,1-溴-3-氯丙烷毒性更低,而且更有助于形成致密的中間層。

      3. 蛋白沉淀步驟采用乙醇和水替代異丙醇,以獲得更高的蛋白得率。

      4. 蛋白溶解步驟采用含有尿素的SDS buffer。無需加熱或超聲等額外操作便能夠有效溶解高分子蛋白,從而提高得率。


      驗證實驗結果表明,對比直接用RIPA裂解液對組織進行蛋白抽提,使用優化的TRIzol方法從已經提取完DNA,RNA而剩余的有機相中提取肌肉蛋白,具有更高的蛋白得率(Figure 1. A)。尤其對于高分子量大蛋白的提取效率更高,這可能得益于更有效的溶解(Figure 1. B)。


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      同時,使用該方法提取蛋白可直接用于下游Western blot實驗。能夠準確辨別出 MyHC在增殖的C2C12細胞中不表達,但是在分化的細胞中表達(Figure 2. A)。而對于磷酸化Western blot,也鑒定出超負荷所造成的肌肉肥大組中Akt和RPS6的磷酸化水平上升Figure 2. B,C)


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      總結一下,小編今天為大家介紹了一款便宜、簡單、快速的從TRIzol有機相中高得率提取蛋白的方法,幫助大家實現從一個生物樣本中同時獲得DNA、RNA和蛋白質,并且與下游的Western blot實驗直接兼容。特別要提醒的是,美國Next Advance 公司研發的Bullet Blender是一款新穎、快速、高通量、高穩定性的組織細胞勻漿儀,具有樣品勻漿更徹底、得率高、通量高、無交叉污染、生物大分子完整性好等特點,滿足您多方面的樣品勻漿需求。


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      基因有限公司作為Next Advance在中國區的代理商,邀請您一同關注我們的官方公眾號“基因快訊”。如下了解更多信息,回復本微信或直接聯系您身邊的基因有限公司員工即可。


      參考文獻:

      Wen Y, Vechetti IJ Jr, Valentino TR, McCarthy JJ. High-yield skeletal muscle protein recovery from TRIzol after RNA and DNA extraction. Biotechniques. 2020 Oct;69(4):264-269. doi: 10.2144/btn-2020-0083. Epub 2020 Aug 11. PMID: 32777951; PMCID: PMC7566772.


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